重组质粒pEGFP-N1-apoJ的构建及在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达研究

摘要

目的：体外构建重组质粒pEGFP-N1-apoJ，转染大鼠骨髓间充质干细胞，并检测其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达，探索最优转染条件。　　方法：体外培养大鼠骨髓间充质干细胞，利用脂质体转染pEGFP-N1-apoJ，探索最优转染条件，确定转染效率，并通过Real-time PCR、免疫细胞化学法、Western Blot法检测载脂蛋白J(apoJ)的表达。　　结果：转染后大鼠骨髓间充质干细胞中绿色荧光蛋白得到表达，脂质体5 ul与重组质粒2.0 ug形成转染复合物进行转染后72小时转染效率为35％。利用Real-time PCR、免疫细胞化学法和western blot法检测证实了重组质粒pEGFP-N1-apoJ携带的外源性aopJ在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达。　　结论：利用脂质体介导重组质粒pEGFP-N1-apoJ成功转染体外培养的BMSCs，脂质体LipofectamineTM20005 ul与重组质粒pEGFP-N1-apoJ2.0ug为形成转染复合物的最优比例，且在转染后72小时转染效率最高。经Real-time PCR、免疫细胞化学法及蛋白免疫印迹法检测，外源性载脂蛋白J基因在体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞中得到了有效的转录与翻译，体外成功建立表达外源性载脂蛋白J基因的大鼠骨髓间充质干细胞体系。体外培养的转基因大鼠骨髓间充质干细胞能分泌载脂蛋白J，使得后续研究高表达外源性载脂蛋白J的骨髓间充质干细胞移植治疗脑出血拥有了可能性。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 主要实验试剂与材料

3 主要实验仪器

4 实验方法

结果

1 光学显微镜下观察体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞

2 利用脂质体将质粒转入体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞

3 外源性目的基因apoJ在体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞中的表达

4 采用免疫细胞化学法检测载脂蛋白J在转染后各组细胞中的表达

5 转染后A组、B组和C组细胞经Western blot法检测载脂蛋白J的表达

讨论

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

载脂蛋白J(apoJ)在中枢神经系统疾病中的研究进展 综述

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