牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

摘要

为了研制一种检测牛布鲁氏菌抗体的间接ELISA试剂盒,试验以提纯的羊布鲁氏菌WS-01株脂多糖(LPS)作为包被抗原,建立牛布鲁氏菌间接ELISA方法。筛选最佳试剂盒组分并优化反应条件,制备牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒,并用该试剂盒对182份布鲁氏菌病阳性血清和143份布鲁氏菌病阴性血清进行检测,检测结果经SPSS17.0软件分析,构建受试者工作曲线(ROC)及曲线下面积,以最高敏感性和特异性确定临界点。使用布病标准阳性血清按2的倍比稀释,采用建立的间接ELISA方法进行检测,得出阳性临界值时的最大稀释倍数。使用本研究建立的间接ELISA试剂盒及国外商品化试剂盒对临床采集的411份样品进行比对检测,比较其符合率。结果表明:当阳性血清稀释到1∶128时,通过建立的间接ELISA检测结果仍为阳性,该方法与其他常见病无交叉反应,重复性检测批间变异系数均小于10%,保存期试验确定试剂盒可在2℃~8℃下保存12个月;选取411份样品进行牛布鲁氏菌检测,本研究建立的试剂盒与国外试剂盒相比符合率为91.24%,说明两种试剂盒符合率较高,为牛布鲁氏菌的临床诊断提供了技术手段。