丹皮酚对IL-1β诱导HFLS-RA的保护作用及相关机制研究

摘要

目的 探讨丹皮酚对白细胞介素(IL)-1β诱导人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)的保护作用及机制.方法 将HFLS-RA细胞分为空白对照组,10μg/L IL-1β组及0.1、1、10、100μmol/L丹皮酚组,采用MTT法检测细胞增殖情况;酶联免疫吸附测定试验(ELISA)法检测HFLS-RA中肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平.采用免疫荧光法观察空白对照组、10μg/L IL-1β组及10μmol/L丹皮酚组HFLS-RA中核因子(NF)-κB p65细胞核移位情况;Western blot法检测空白对照组,10μg/L IL-1β组,0.1、1、10μmol/L丹皮酚组及阴性对照组(仅10μmol/L丹皮酚处理)的基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-3和Toll样受体-4(TLR4)蛋白表达.将24只雄性DBA/1小鼠随机均分为对照组、CIA组和治疗组,对小鼠进行四肢累计评分,HE染色观察关节组织病理学变化,ELISA法检测滑膜组织中TNF-α、IL-1β水平.结果 丹皮酚对IL-1β诱导HFLS-RA细胞增殖无明显抑制作用.与空白对照组相比,10μg/L IL-1β组TNF-α、IL-6、NF-κB p65核移位、MMP-1、MMP-3和TLR4蛋白表达水平均升高,而经丹皮酚干预后可逆转这些改变(P<0.05).与CIA组相比,治疗组小鼠四肢累计评分明显下降(P<0.05);HE染色结果 示丹皮酚治疗48 d时踝关节病理变化有所改善,其中炎性细胞明显下降,软骨破坏减轻.治疗组小鼠滑膜组织中TNF-α、IL-1β水平低于CIA组.结论 丹皮酚具有减轻IL-1β诱导HFLS-RA炎性因子表达和缓解CIA小鼠关节炎症状的作用,其机制可能与抑制TLR-4-NF-κB p65通路,减轻炎症反应有关.