分步克隆法构建人拓扑异构酶Ⅲalpha真核反义表达载体及鉴定

摘要

目的应用分步克隆法构建人拓扑异构酶Ⅲ alpha (hTOP 3 alpha)真核反义表达载体,为进一步阐明其与控制细胞周期的相关基因ATM之间的相互作用,研究ATM的生物学功能奠定基础.方法采用分步克隆法首先用 Hind Ⅲ和EcoRI双酶切构建插入2.6 kb的片段,再用EcoRI酶切插入另一1 kb的片段,最终获得人拓扑异构酶Ⅲ真核反义表达的重组载体.结果经酶切、测序鉴定,人拓扑异构酶Ⅲ真核反义表达载体构建成功.结论为研究ATM基因与人拓扑异构酶Ⅲ的相互作用,阐明其生物学功能奠定了基础,同时为大片段的基因的表达载体构建探索了新的方法和途径.