反义核酸

摘要： 目的 反义核酸是一段与靶基因互补的单链寡核苷酸序列,通过与细胞内核酸杂交成双链结构抑制靶基因转录和翻译过程,从而调控基因表达.然而,无载体递送反义核酸跨膜能力较差且寡核苷酸磷酸二酯键易被核酶水解.为提高反义核酸入胞效率,并对活性作用的发挥进行进一步优化,本课题主要从寻求高效低毒的载体系统及优化修饰策略入手对其进行研究.方法 本研究利用中性胞苷脂材(DNCA)混合阳离子脂质体(CLD)对反义核酸G3139包载递送,结合部分位点磷硫代(PS)修饰方式,考察不同修饰位点的序列活性与作用机制.结果 与结论 采用混合脂材包载能显著提高反义核酸G3139的抗MCF7/ADR细胞增殖能力,并发现9 ～16位(5'-端计算)区域内多位点(≥4)修饰物抗肿瘤活性较高.此外,G3139部分位点PS修饰物有效激活RNase H降解靶mRNA,并降低杂交双链Tm(DNA的熔解温度)值.结合转录组学与蛋白组学研究,确证减少PS修饰位点数可以降低反义核酸与非特异性靶标结合,从而降低毒副作用.

摘要： 化学修饰是改善反义核酸成药性的重要手段。在本文的研究中,采用化学合成的方法,以已知的化合物(S)-1,3-二(苄氧基)-4-(1,3-二噻烷-2-基)丁-2-酮为原料,经过4步反应,得到苄基保护的C4''-CF3-β-L-脱氧胸苷5a和C4''-CF3-α-L-脱氧胸苷5b。然后通过氯化钯催化氢化脱除5b的苄基保护基,制得C4''-CF3-α-L-脱氧胸苷6。通过核磁共振1H谱、13C谱、19F谱和二维NOESY谱,确认了5a,5b和6的结构以及C4''和C1''的构型。经过两步常规反应,将6转化为C4''-CF3-α-L-脱氧胸苷亚磷酰胺8,并使用1H谱,31P谱,ESI-MS高分辨率质谱确定了最终目标产物8的结构正确性。

摘要： 目的 研究Apollon对HL-60细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用反义核酸技术下调HL-60细胞中Apollon的表达,采用M T T法检测细胞增殖能力,以AnnexinV-PI法检测细胞的凋亡.结果 Apollon反义核酸可以抑制细胞的增殖,促进细胞的凋亡.结论 Apollon调节了HL-60细胞增殖和凋亡能力,是白血病潜在的治疗靶点.

摘要： 环状结构的核酸因其首尾相连的特殊结构,可提高其对核酸外切酶的稳定性,并且其环状结构可使其具有特殊的功能.早期由于检测技术的限制,研究者对环状核酸的研究相对较少.近年来,随着科学技术的进步,研究者发现生物体内存在各种环状核酸,并具有独特的生理调节功能.对于较小的环状寡聚核苷酸（几十个碱基）在生命体中是否存在以及其可能的功能仍未知晓.本文综述了环状核酸（特别是较小环的寡聚核苷酸）主要的两类合成法（酶合成法和化学合成法）,并比较了它们各自的优缺点.同时阐述了各种环状功能核酸的结构特性以及它们对特定生物活性和基因功能的特异性调控,为阐明环状核酸在生物体内的产生及其作用机制的化学生物学研究提供了新的研究工具.

摘要： 建立C57BL/6鼠雄激素非依赖性前列腺癌模型,探讨hTERT基因反义核酸(AS PS-ODN)对肿瘤坏死因子-a(TNF-a)抗肿瘤的影响机制.建立雄激素非依赖性前列腺癌模型,通过肿瘤抑制率测定,肿瘤细胞生长周期时间、测定及肿瘤组织病理学检测观察TNF-a对肿瘤细胞PC3的抑制作用.hTERT基因AS PS-ODN联合TNF-a治疗组肿瘤生长明显抑制,与TNF-a组和对照组比较有统计学意义(P<0.05).hTERT AS PS-ODN对TNF-a抗C57BL/6鼠雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3有协同作用.

摘要： 目的：研究金属蛋白酶解离素28（ADAM28）反义核酸（AS⁃ODN）和正义对照（S⁃ODN）对人牙龈成纤维细胞（ HGFs）表达牙骨质附着蛋白（ CAP）和骨桥蛋白（ OPN）的影响。方法：采用细胞培养、基因转染、免疫细胞化学和图像分析技术检测ADAM28对HGFs表达CAP、OPN的影响。结果：ADAM28 AS⁃ODN转染HGFs后，细胞内CAP、OPN的表达显著降低（P＜0.05），ADAM28 S⁃ODN转染HGFs后，细胞内CAP、OPN的表达显著升高（P＜0.05）。结论：ADAM28 AS⁃ODN可有效封闭HGFs内CAP、OPN的表达。%Objective:To study the effects of ADAM28 antisense oligodeoxynucleotide( AS⁃ODN) and S⁃ODN on hu⁃man gingival fibroblasts(HGFs)expressing cementum attachment protein(CAP)and osteopontin(OPN). Methods:Cell cul⁃ture,gene transfection,immunocytochemistry and image analysis techniques were used to detect the effects of ADAM28 on HGFs expressing CAP and OPN. Results:The expressions of CAP and OPN significantly lowered after ADAM28 AS⁃ODN were transfected into HGFs(P<0. 05). The expressions of CAP and OPN notably heightened after ADAM28 S⁃ODN were transfected into HGFs(P<0. 05). Conclusion:ADAM28 AS⁃ODN could effectively block the expressions of CAP and OPN into HGFs.

摘要： 从基因组的双链DNA (dsDNA),到编码和非编码RNA(mRNA、lncRNA和miRNA等),只要与疾病发生相关,都可能作为基因治疗的靶标.这些靶标可被替换、修复、补充、抑制或消除,取决于所采取的具体基因治疗方法.基因编辑技术是将致病基因裁剪缝补为正常的基因,而化学合成的和体内表达的核酸药物则主要靶向致病性RNA.与此同时,转运核酸药物的方法也在大力研发中,包括病毒或质粒表达载体和各种聚合物材料.核酸药物的成药性、转运载体的安全性和效率是基因治疗方法面临的挑战性问题.本文简要综述近年来基因治疗药物,特别是反义核酸、核酶、脱氧核酶、小干扰RNA(siRNA)和微小RNA(miRNA)等化学合成的核酸药物,以及化学修饰在提高核酸药物的效价、抗酶解稳定性和有效转运等关键技术方面的进展.随着对基因调控在疾病发生过程中认识的逐步深入和核酸药物优化技术的进步,核酸药物的研发步伐将会越来越快,期待包括siRNA药物在内的更多核酸药物在不久的将来应用于临床治疗.

摘要： 最近,一条美国批准“首个基因疗法”的消息吸引了媒体的关注。美国食品药品监督管理局（FDA）发表声明称,瑞士诺华公司的新基因疗法已获得批准,用于治疗25岁以下的复发难治型B细胞急性淋巴细胞白血病患者。如果认真调研一下就会发现,美国批准的所谓“首个基因疗法”其实并非首个,此前已批准多个基因疗法。基因疗法及其多个“首个批准”基因疗法起源于20世纪50年代,在90年代有了突破性进展。基因疗法是利用基因工程技术将正常基因引入患者细胞内,

摘要： 核酸的化学修饰是反义寡核苷酸分子成药的关键技术,本文以相应的2'-氟阿拉伯糖尿苷(2'-F-araU)及2'-氟尿苷(2'-F-rU)为起点,通过在糖基的4'-位引入2-甲氧乙氧基(MOE),合成了新的单体2'-F-4'-C-MOE-araU 及其差向异构体2'-F-4'-C-MOE-rU,并将它们转化为相应的亚磷酰胺,用于所需DNA序列的合成.它们对于dsDNA和DNA-RNA双螺旋的热稳定性的影响显示,与2'-F-4'-C-MOE-rU及2'-F-araU修饰的寡核苷酸相比,2'-F-4'-C-MOE-araU修饰,特别是在5'-嘧啶-嘌呤-3'(5'-pyrimidine-purine-3')步序上形成C-HF-C假氢键时,可显著增强寡核苷酸对互补RNA的亲和力,并能够保持对互补DNA的亲和力.同时,2'-F-4'-C-MOE-araU修饰后的寡核苷酸对完全配对的RNA/DNA单链均具有良好的结合特异性;而2'-F-4'-C-MOE-rU仅对互补RNA具有较好的杂交能力.不过,3'-末端2'-F-4'-C-MOE-araU修饰的寡核苷酸对核酸酶水解的稳定性却低于2'-F-4'-C-MOE-rU修饰.这些结果表明了在2'-F-ANA单元上进一步引入4'-位修饰的可行性,以及2'-F取代单体对于双螺旋结构的稳定性具有显著影响,为进一步的核酸化学修饰和反义核酸药物的开发提供了新的技术支持.

摘要： 目的：研究以miR-17为靶点的反义核酸对人白血病K-562细胞的生长抑制作用.方法：人工合成miR-17的反义核酸,硫代修饰,以LipofectamineTM 2000为载体转入K562细胞.MTT检测转染反义核酸后K-562细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞的凋亡水平,实时荧光定量PCR检测反义核酸作用后K-562细胞内miR-17的相对表达水平.结果：MTT结果显示,转染反义核酸后的24、48、72 h K-562细胞的增殖活性显著下降,与随机对照组、空白对照组相比较有显著统计学差异(P＜0.05)；流式细胞术检测结果表明,在转染反义核酸48 h后细胞的凋亡水平显著增加,与随机对照组,空白对照组有统计学差异(P＜0.05)；实时荧光定量PCR结果证实,在反义核酸作用后,K-562细胞内的miR-17的相对表达水平明显下降,与随机组,空白组相比较具有统计学差异(P＜0.05).结论：以miR-17为靶点的反义核酸可抑制K-562细胞的增殖活性,并显著促进细胞的凋亡.

摘要： 口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。虽然传统疫苗已被广泛应用，但是免疫效果均不理想。随着分子生物学的迅速发展，反义核酸技术已成为基因治疗的一种重要方法，在口蹄疫的防治中有良好的前景。

摘要： 作者反义核酸逆转人表皮肿瘤细胞KB-A-1多药抗药性的基础上,对反义核酸进行阿霉素共价偶联修饰,以改善反义核酸片段的亲和性,稳定性和通透性,以提高其功效.

摘要： 反义核酸是根据抗碱基配对原理能与DNA或RNA互补结合并封闭其表达的一段核酸分子,本文就反义核酸五大技术领域,即反义DNA,反义RNA,核酶,反基因及肽核酸作了简单概述.

摘要： 消化道肿瘤的内分泌治疗可追溯到19世纪末。改变体内内分泌环境的平衡，导致某些肿瘤的消退；随着肿瘤生长调节机制研究的不断深入，可望通过阻断调节过程中的多个环节来抑制肿瘤细胞的生长，包括内源性激素水平的调节，受体的阻断，细胞内信号传导以及激素基因的表达等方面。本文介绍了消化道激素拮抗剂、性激素、内分泌免疫治疗以及反义核酸治疗等消化道肿瘤内分泌治疗方法。

摘要： 近年来Survivin被认为是最有效的凋亡抑制剂，其生物学活性为：①通过抑制caspase-3、caspase-7或caspase-9的活性抑制细胞凋亡，②通过干扰有丝分裂纺锤体的形成调节细胞周期G2／M期，诱导有丝分裂，③是生长因子诱导血管形成中的保护性基因，在血管内皮细胞和新生血管的形成中有重要作用。Survivin在人类许多肿瘤组织中表达，与恶性肿瘤的发生发展密切相关。以Survivin作为标记物对肿瘤进行分子学检测是行之有效的手段，且可通过免疫组化染色检测肿瘤细胞微转移。体内外的实验证实，反义核酸可抑制Survivin表达，减少肿瘤细胞生长潜力，并增加肿瘤对放疗和化疗的敏感性。因此Survivin将在肿瘤的诊断和治疗中发挥新的作用。

摘要： 北京大学的放射性药物化学研究始于1983年.在第一个10年中,我们的主要研究方向是抗肿瘤单克隆抗体及其片断的放射标记.自1993起,我们对BATO类和含[Tc≡N]2+核的心肌灌注显像剂开展了研究.在此期间,国际上再度兴起硼中子俘获治疗(BNCT)的研究热潮,我们在国家攀登计划B的资助下,分出部分力量进行了5年的BNCT药物的研究.2000年以来,我们继续以诊断和治疗肿瘤的放射性药物作为研究对象,集中研究了组织乏氧显像剂、肿瘤多药耐药性的分子成像试剂及其逆转剂,并尝试将反义核酸技术、噬菌体展示技术用于诊断肿瘤的放射性药物的开发,对于涉及的一些反应机理和配合物结构问题开展理论化学的研究.本文讨论：1.乏氧显像剂研究进展，2.肿瘤多药耐药性的分子成像试剂及其逆转剂，3.放射性标记的多肽和反义核酸肿瘤显像剂的研究，4.羰基锝放射性药物及其它锝化学基础研究。

摘要： 本实验根据肝癌MDR特点,针对不同MDR基因进行反义寡脱氧核苷酸逆转人肝癌多药耐药性的实验研究.

摘要： 本实验根据肝癌MDR特点,针对不同MDR基因进行反义寡脱氧核苷酸逆转人肝癌多药耐药性的实验研究.

摘要： 本发明公开了PCAT1的反义寡核苷酸及其在制备抑制前列腺癌核酸药物中的应用。本发明采用生物信息学在线工具分析PCAT1序列信息，筛选长度在20碱基的、能够结合的反义寡核苷酸位点，同时利用分子生物学实验验证，证明反义寡核苷酸能够降低PCAT1在细胞内的水平。本发明为临床上治疗去势抵抗性前列腺癌，提供了新的手段。

摘要： 本发明公开了SP1的反义寡核苷酸及其在制备抑制SP1阳性癌症核酸药物中的应用。用生物信息学在线工具分析SP1蛋白转录组序列信息，筛选长度在20碱基的、能够结合的反义寡核苷酸位点，同时利用分子生物学实验验证，证明反义寡核苷酸ASOSP1能够降低SP1mRNA及其蛋白在细胞内的水平。本发明为临床上治疗SP1高表达且SP1发挥重要作用的多种癌症细胞，提供了核酸药物制备的新的手段。

摘要： 本发明提供一种能够跳读人抗肌萎缩蛋白基因的第45号外显子的低聚物。

摘要： 本发明涉及一种用于防控猪流行性腹泻病毒PEDV的特异性抗病毒肽核酸PNA，针对PEDV中N和S的基因保守部分设计高效特异性的反义核酸序列，并采用特定工艺人工合成肽核酸片段，该序列与上述保守性靶基因互补，根据碱基互补原理，反义核酸序列特异性地与PEDV中的N和S对应的靶基因相结合，诱导核酶对靶基因进行降解，从而阻断靶基因的转录与表达，抑制PEDV在机体内复制与装配，以达到防控猪流行性腹泻的目的。本发明还涉及含有该反义核酸序列的药物组合物，及其在动物药物上的用途。本发明无毒副作用，无耐药性，能特异性直接抑制PEDV复制，抗病毒效果好，无药残等食品安全问题。

摘要： 本发明涉及一种用于防控猪流行性腹泻病毒PEDV的特异性抗病毒肽核酸PNA，针对PEDV中N和S的基因保守部分设计高效特异性的反义核酸序列，并采用特定工艺人工合成肽核酸片段，该序列与上述保守性靶基因互补，根据碱基互补原理，反义核酸序列特异性地与PEDV中的N和S对应的靶基因相结合，诱导核酶对靶基因进行降解，从而阻断靶基因的转录与表达，抑制PEDV在机体内复制与装配，以达到防控猪流行性腹泻的目的。本发明还涉及含有该反义核酸序列的药物组合物，及其在动物药物上的用途。本发明无毒副作用，无耐药性，能特异性直接抑制PEDV复制，抗病毒效果好，无药残等食品安全问题。

摘要： 本发明公开了一种反义核酸药物的包载方法、由该方法制备得到的药物制剂及其在肝癌治疗中的应用。本发明首先提出了一种反义核酸药物的包载方法，然后将针对于治疗肝癌的反义核酸CT102的包载方法和化学修饰方法结合起来制备得到了一种用于抗肝癌的药物制剂，研究发现，经包载后的CT102比裸给药物显示出更高的肝癌抑制活性及体内半衰期；同时，包载的CT102在二分之一量情况下制剂，仍显示出明显高于裸给CT102的抗肝癌活性。在此基础上，经修饰后的CT102MOE5比CT102显示出更高的肝癌抑制活性及体内半衰期。本发明的提出为抗肝癌反义核酸药物在临床的广泛应用奠定了基础，同时在基因治疗领域也将具有广泛的应用前景。

摘要： 本发明旨在降低整合人工核酸碱基(LNA等)的反义核酸的强肝毒性。根据本发明，通过保持反义核酸的序列或人工核酸碱基(LNA等)的个数的情况下，向翼区域追加附加特定的人工核酸碱基(MCA等)，使由反义核酸的毒性减轻而提供交联型反义核酸。另外，本发明可提供使肝毒性显著地降低的反义核酸医药。

摘要： 本发明公开了一种应用氧化石墨烯筛选新型冠状病毒反义核酸的方法，属于医药领域。本发明的方法为先将新型冠状病毒核酸与氧化石墨烯结合：将荧光素标记的新型冠状病毒核酸SD‑1、SD‑2、SD‑3分别与氧化石墨烯溶液混匀、孵育；荧光检测：向混合溶液中加入反义核酸链混匀、孵育，得到待检测溶液，用酶标仪检测荧光光谱，实现了最高荧光恢复比例达75.35％～88.46％。本发明方法操作简单、检测快速，具有非常高的特异性。

摘要： 本发明公开了一种双重反义核酸协同光动力治疗三阴性乳腺癌的方法，属于医药技术领域。本发明公开了一种双重反义寡核酸协同光动力治疗三阴性乳腺癌的纳米递送系统。该纳米递送系统将与光敏剂结合的反义寡核酸Ce6‑anti‑miR‑21和Ce6‑anti‑miR‑155负载到细胞中，在激光照射下产生大量细胞毒性ROS以有效诱导肿瘤细胞的凋亡。结果表明，该纳米系统在激光照射下能有效抑制MDA‑MB‑231细胞的增殖和迁移，使细胞存活率和迁移率降低至40.7％和77％。为新型光敏药物开发提供了思路。

摘要： 本发明通过提出miR‑208a‑3p反义核酸在治疗心肌缺血再灌注损伤中的应用，并公开miR‑208a‑3p反义核酸的提取方法，通过小鼠对比实验，明确miR‑208a‑3p反义核酸在心肌缺血再灌注损伤中起的治疗作用，解决传统心肌缺血再灌注损伤药物治疗效果不理想的问题，为心肌缺血再灌注损伤的治疗开辟更广阔的前景。