正反义人PIN1基因克隆及真核表达载体的构建

摘要

目的克隆正、反义人PIN1基因(hPIN1)及构建hPIN1基因正、反义真核表达载体。方法应用RT-PCR技术从人骨肉瘤细胞系MG-63细胞总RNA中成功扩增出990bp包含hPIN1基因编码区的cDNA序列,按正、反方向加上BamHⅠ及HindⅢ双酶切位点后形成正、反义hPIN1基因,然后连入含BamHⅠ及HindⅢ双酶切位点的pIRES2-EGFP表达质粒上,构建正、反义hPIN1基因的重组真核表达质粒phPIN1。结果扩增的cDNA经测秩序与基因文库完全一致;BamHⅠ及HindⅢ双酶切后,正、反义表达质粒形成5.3+0.99kb两条带,与理论计算值完全一致。结论成功克隆正、反义人PIN1基因及构建hPIN1基因的正、反义真核表达载体。