茶树CsSMT基因的克隆、原核表达及植物超表达载体构建

摘要

为了发掘利用茶树(Camellia sinensis)富硒关键酶硒代半胱氨酸甲基转移酶(Selenocysteine methyltransferase,SMT)基因CsSMT,基于宁州2号转录组测序结果,通过RACE克隆该基因的cDNA全长,并通过原核表达和蛋白质印迹(Western blotting)验证该基因,然后构建超表达载体,转化至根癌农杆菌.结果表明:该基因cDNA全长为1277 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)为1 050 bp,与NCBI公布的茶树该基因ORF序列有8个点突变,且缺少GTCGTC序列.CsSMT基因编码349个氨基酸,其氨基酸序列与毛果杨、野生大豆、黄芪的SMT以及川桑的同型半胱氨酸-S-甲基转移酶2(Homocysteine-S-methyltransferase2,HMT2)的氨基酸序列有较高的相似性.目标蛋白分子量约38 kDa,为水溶性蛋白,与预测结果相符.成功构建CsSMT基因的超表达载体,并获得携带CsSMT的农杆菌菌株.