红花黄酮醇合酶基因的克隆、表达分析及植物超表达载体构建

摘要

黄酮醇合酶(flavonol synthase,FLS)是黄酮化合物代谢途径中的关键酶之一.本研究在红花转录组测序结果中获得FLS中间序列的基础上,采用RT-PCR和RACE技术,从我国传统中药材红花花瓣中克隆到黄酮醇合酶基因的全长cDNA.该基因全长1201bp,开放阅读框1011bp,编码336个氨基酸.系统进化分析表明，红花FLS基因编码氨基酸与同属菊科植物氨基酸具有一定的同源性，其中与金光菊的亲缘关系最近。根据红花FLS基因片段设计PCR引物进行荧光定量PCR,结果表明，红花FLS基因在吉红油姊妹系的盛花期表达量最高。同时，通过分子生物学方法，成功构建pBASTA-FLS植物表达载体，为后续研究该基因的功能鉴定及在黄酮化合物合成途径中的作用奠定了基础。