UHRF1基因沉默对人肺腺癌A549细胞侵袭和迁移的影响及机制

摘要

目的 观察泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)基因沉默对肺腺癌A549细胞侵袭和迁移能力的影响,并探讨其机制.方法 将细胞随机分为3组,沉默组、空载组分别转染针对UHRF1基因的靶向shRNA干扰慢病毒质粒及阴性对照慢病毒空载质粒72 h,对照组不转染.采用Transwell实验观察细胞体外侵袭能力(穿膜细胞数),细胞划痕实验观察细胞体外迁移能力(24 h划痕相对宽度);分别采用RT-PCR法和Western blotting法检测细胞中的UHRF1、上皮间质转化(EMT)相关分子(E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin)mRNA和蛋白;甲基化特异性PCR检测细胞中KISS1和PAX5基因启动子区甲基化程度.结果 与对照组和空载组比较,沉默组穿膜细胞减少,24 h划痕相对宽度增大,细胞中UHRF1、N-Cadherin、Vimentin mRNA和蛋白表达减少,E-Cadherin mRNA和蛋白表达增加,KISS1、PAX5启动子区甲基化程度低(P均<0.01);对照组和空载组各指标差异无统计学意义(P均>0.05).结论 慢病毒介导的shRNA沉默UHRF1基因表达,可抑制A549细胞侵袭和迁移能力;其机制可能与降低KISS1和PAX5基因启动子区的甲基化程度,从而抑制EMT过程有关.