p66Shc在绵羊卵母细胞中的表达及其与 胞质氧化还原稳态的关系

摘要

[目的]研究p66Shc在绵羊卵母细胞中的表达特征及其与卵母细胞胞质氧化还原稳态的关系,为揭示p66Shc参与调控卵母细胞胞质氧化还原稳态分子机制提供理论依据.[方法]试验所用卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)来源于屠宰场的绵羊卵巢.分别收集成熟前优质和劣质、常规成熟24 h及成熟30 h老化的卵母细胞,采用实时荧光定量PCR对成熟前后不同质量绵羊卵母细胞中p66Shc mRNA的表达量进行分析,利用细胞免疫荧光结合MitoTracker Red探针对p66Shc蛋白和线粒体进行共定位,同时利用荧光探针DCFH-DA和卵母细胞自发荧光分别对成熟前后不同质量卵母细胞内ROS水平和氧化还原稳态进行检测.此外,采用外源H2O2诱导的氧化应激处理成熟前优质卵母细胞,并对p66Shc蛋白的表达及定位进行了检测分析.[结果]实时荧光定量PCR结果显示,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞中p66Shc mRNA表达量分别显著(P0.05).共定位结果表明,p66蛋白主要分布在线粒体分布活跃的区域.细胞免疫荧光结果显示,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞中p66Shc蛋白表达量也分别显著(P<0.05)高于成熟前优质和常规24 h成熟的卵母细胞.与成熟前优质和常规24 h成熟的卵母细胞相比,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞表现出线粒体分布紊乱和活性下降、ROS水平升高以及氧化还原稳态的失衡.此外,与未添加外源H2O2的对照组相比,外源H2O2处理成熟前优质卵母细胞诱导的氧化应激显著(P<0.05)上调p66Shc蛋白的表达并促使p66Shc由胞质向细胞核定位.[结论]p66Shc基因在劣质和老化的绵羊卵母细胞中呈现高水平的表达,H2O2诱导的氧化应激显著上调p66Shc蛋白的表达并影响其亚细胞定位.总之,绵羊卵母细胞中p66Shc表达上调影响了胞质的氧化还原稳态.