不同年龄段人视网膜色素上皮细胞氧化应激过程中一氧化氮的水平分析

摘要

目的 探讨不同年龄段人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化应激过程中一氧化氮(nitric ox-ide,NO)的释放水平以及色素上皮衍生因子(pigment epithelium-deriverd factor,PEDF)对不同年龄段人RPE细胞中NO释放的影响.方法 将原代RPE细胞(分别来源于9 ～20岁,50 ～55岁,60 ～70岁,＞70岁人群)用含体积分数10%胎牛血清的DMEM／F12培养基培养,分为四组进行实验,分别为不加任何物质干预的阴性对照组,单独加300 μmol·L-1H2O2氧化损伤组,单独加250 μg·L-1PEDF处理保护组以及同时加入250 μg·L-1PEDF+300 μmol·L-1H2O2的损伤保护组,处理12 h,随后用NO检测试剂盒对各组细胞NO水平进行检测.结果 倒置相差显微镜观察培养的人原代RPE细胞内可见清晰透明的圆形细胞核以及双核,胞浆内含丰富黑色素颗粒.H2O2氧化损伤组各年龄段细胞相邻细胞发生粘连,细胞皱缩加重,死亡及悬浮细胞增多.PEDF处理保护组较H2O2氧化损伤组中的细胞胞质更加饱满,死亡细胞数量显著减少.随着年龄的增长,未作任何 处理的50～55岁、60～70岁、＞70岁RPE细胞内NO的释放水平分别是9～20岁年龄段的1.37倍、1.25倍、1.62倍,差异均无统计学意义(均为P＞0.05).随着年龄的增加,H2O2氧化损伤组9～20岁、50～55岁、60～70岁,＞70岁RPE细胞内NO的释放水平分别是阴性对照组的1.35倍、1.15倍、0.98倍及1.05倍,差异均无统计学意义(均为P＞0.05),而PEDF处理保护组能够保护氧化损伤条件下不同年龄段人RPE细胞,但PEDF处理保护组9～20岁、50～55岁、60～70岁、＞70岁RPE细胞内NO的释放水平分别是阴性对照组的1.17倍、1.10倍、1.04倍及0.96倍,NO的释放量差异均无统计学意义(均为P＞0.05).结论 在不同年龄段人RPE细胞中NO的两种完全相反作用可能处于一个动态平衡中,故NO释放水平无明显变化.PEDF对RPE细胞的保护作用不通过NO途径.