人睫状肌细胞中核转录因子抑制因子-α与基质金属蛋白酶-2作用机制研究

摘要

目的 探讨在人睫状肌(human ciliary muscle,HCM)细胞中,基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2.MMP-2)的表达和核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号转导通路之间的关系.方法 合成针对人核转录因子抑制因子-α (inhibitor α of nuclear factor-kappa B,IκBα)siRNA片段,并将其转染入HCM中,分别于转染后24 h、48 h、72 h利用RT-PCR和Western blot法检测IκBα、NF-κB p65和MMP-2 mRNA和蛋白水平的表达情况.Zymography技术检测酶原形式的MMP-2 (pro-MMP-2)和活性形式的MMP-2(active-MMP-2)的表达变化.结果 转染IκBα siRNA进入HCM后24 h、48 h、72 h,IκBα mRNA水平和蛋白水平均下降(均为P ＜0.05).IκBα siRNA转染入HCM 24 h、48 h、72 h,实验组NF-κB p65总mRNA水平和蛋白水平变化均无显著差异(均为P＞0.05),但细胞核内的NF-κB p65蛋白表达却大幅度升高(均为P＜0.05).MMP-2 mRNA水平和蛋白水平的表达在IκBα siR-NA转染入HCM细胞后各时间点均有上升,转染后72 h表达最高(均为P＜0.05).Pro-MMP-2和active-MMP-2的表达也在转染后各时间点不同程度增加,峰值也是出现在转染后72 h,分别为170.2％±10.4％和151.8％±8.4％(均为P＜0.05).各时间点pro-MMP-2、active-MMP-2均较空白对照组表达增加(均为P＜0.05).结论 在HCM细胞中通过抑制IκBα表达,引起NF-κB p65的激活,转位入HCM细胞核,促进了MMP-2分泌和活化,从而降解HCM细胞外基质,增加葡萄膜巩膜房水外流.