羊口疮病毒VIR蛋白生物活性鉴定及表位预测

摘要

为研究羊口疮病毒(ORFV)VIR蛋白的生物活性,扩增了绿色荧光蛋白基因EGFP和ORFV的VIR基因,构建了真核表达载体pVAX1-EGFP和pVAX1-VIR-EGFP,转染至BHK-21细胞,在荧光显微镜下进行了EGFP和VIR与EGFP融合蛋白的绿色荧光检测,用ORFV的全病毒血清作一抗,进行了Western blot检测,应用生物信息学方法,构建了VIR蛋白和VIR与EGFP融合蛋白的三级结构并进行了比较,进行了细胞表位预测。结果显示,pVAX1-EGFP和pVAX1-VIR-EGFP载体在BHK-21细胞中均表达出了绿色荧光,但VIR与EGFP融合蛋白表达的荧光弱于EGFP表达的荧光,Western blot检测出了53 ku左右的融合蛋白条带,说明VIR与EGFP融合蛋白具有较高的特异性。VIR蛋白和VIR与EGFP融合蛋白的三级结构直观地反映了VIR蛋白和VIR与EGFP融合蛋白的差异,预测出VIR蛋白的优势B细胞抗原表位4个,HLA-A*0201限制性CTL优势表位3个,为VIR蛋白的生物学功能研究奠定了基础。