美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒GP4蛋白中和活性单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

摘要

为制备具有中和活性的抗猪繁殖与呼吸综合征病-(PRRSV)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究利用PRRSV SD53株的超离病毒作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠并进行细胞融合.采用PRRSVSD53株和真核表达的PRRSV各结构蛋白作为检测抗原,应用间接免疫荧光试验(IFA)筛选到一株稳定分泌抗SD53株GP4蛋白的杂交瘤细胞株(LM26).抗体亚类鉴定其为IgG2a,轻链为κ链.原核表达一系列截短的GP4蛋白鉴定LM26的抗原表位结果显示,LM26识别的抗原表位序列为57VVLQDI62,此抗原表位在美洲型PRRSV中相对保守.病毒中和试验结果显示,MAb LM26仅针对PRRSV SD53株具有中和活性,中和效价最高为1:50,对其它美洲株PRRSV均不具有中和活性.该MAb的制备为进一步研究PRRSV GP4蛋白的结构和功能奠定了基础.