猪A群轮状病毒VP6的表达及IgG抗体ELISA检测方法的建立与初步应用

摘要

为建立猪A群轮状病毒抗体间接ELISA检测方法,用于开展对该病毒感染的流行病学调查和免疫抗体评估,进行了猪A群轮状病毒TM-a株内衣壳VP6基因的表达,用SDS-PAGE和Western blot鉴定分析.目的蛋白得到表达,大小约70 ku,Western blot表明,该蛋白与猪A群轮状病毒阳性血清反应.用该蛋白作为包被抗原,通过对条件优化,包被抗原浓度为2 μg/mL,待检血清稀释倍数为1∶40倍,标记抗体的稀释倍数为1∶4 000倍,建立了检测猪轮状病毒血清IgG抗体的间接ELISA方法.用该方法检测临床样品142份,并与间接免疫荧光试验(IFA)对比,结果显示,两者阳性符合率为94.6％,阴性符合率为83.4％,总符合率为91.5％,表明该方法有效可行.用建立的方法检测临床上不同年龄阶段的猪血清639份,分析其临床感染情况.结果证明该方法可用于猪轮状病毒流行病学调查、猪群抗体水平评估.