兔角膜缘干细胞体外分离、培养和生物学鉴定的实验研究

摘要

目的:通过体外培养免角膜缘干细胞,观察其生物学特性,建立兔角膜缘干细胞的体外培养方法.方法0.25%胰蛋白酶消化角膜缘组织,用含15%胎牛血清的DMEM和F12(1:1)的培养液(DF)对兔角膜缘干细胞进行体外培养,形态学观察,培养的细胞早期使用AEl/AE3、晚期使用AE5角蛋白特异的单克隆抗体)作细胞免疫化学鉴定.结果:原代培养细胞48h后开始贴壁,部分细胞由圆形变为卵圆形或长梭形;10～14d形成单层,细胞呈圆形、卵圆形,类角膜上皮细胞;细胞传到第5代左右开始出现老化状态;免疫细胞化学染色:培养的细胞早期AEl/AE3呈阳性而少部分细胞AE5呈阳性,培养的细胞晚期AE5呈阳性.结论:本实验初步建立了一套兔角膜缘干细胞的体外培养方法.