Tet-Off诱导的硫氧还蛋白基因重组腺病毒载体的构建

摘要

目的 克隆人硫氧还蛋白(hTRX)基因,并构建含有该目的 基因的重组腺病毒载体.方法 用内切酶从重组质粒pGEM-TEasy/TRX上切下全长TRXcDNA片段,与穿梭质粒pshuttle2连接,形成pshuttle2-TRX重组质粒,再双酶切pshuttle2-TRX,将带有CMV启动子的目的 片段,插入Tet-Off诱导的Adeno-X病毒DNA中,用PCR、双酶切方法进行鉴定.结果 对pGEM-TEasy/TRX重组质粒进行序列测定,测定结果与GeneBank序列J04026基本一致,其中包括TRXcDNA全长.该实验构建出含TRX的穿梭质粒pshuttle2-TRX,并成功获得Tet-Off诱导的重组腺病毒载体pAdCMV-TRX.结论 TRX基因的克隆及其重组腺病毒载体pAdCMV-TRX的成功构建,为进一步研究TRX生物活性及发病与氧化损伤关系密切的疾病治疗提供新的手段,如病毒性心肌炎、动脉硬化、心肌病、糖尿病、Alzheimers病等.