江西铅山红芽芋胚性愈伤组织的包埋玻璃化超低温保存

摘要

为长期安全保存江西铅山红芽芋种质资源，本文以江西铅山红芽芋的胚性愈伤组织为对象，研究了包埋玻璃化冻存过程中各因素对细胞活力和愈伤组织成活率的影响，优化建立了江西铅山红芽芋胚性愈伤组织包埋玻璃化超低温保存体系。将约0．2g胚性愈伤组织块包埋成海藻酸钙凝胶珠后，在25℃下转入MS＋2mg／LTDZ＋1mg／LNAA＋0．75mol／L蔗糖的培养基中于14h／d光周期下预培养1d；预培养后的胚性愈伤组织块用2mol／L甘油和0．4mol／L蔗糖的混合物在25℃下装载40min；采用PVS2在25℃下脱水30min，更换PVS2后直接投入液氮保存1d；再将胚性愈伤组织块置于37℃恒温水浴中化冻3min，然后用MS＋2mg／LTDZ＋1mg／LNAA＋1．2mol／L蔗糖的液体培养基洗涤3次，每次10min；洗涤后的胚性愈伤组块转入MS＋2mg／LTDZ十1mg／LNAA固体培养基上先暗培养7d再转到14h／d光周期中培养。7d后胚性愈伤组织块开始恢复生长，并且在30d内分化出胚状体；将胚状体再次转入MS＋2mg／LTDZ＋1mg／LNAA固体培养基上，60d后形成完整的植株。红芽芋胚性愈伤组织包埋玻璃化超低温保存后的平均成活率约为60％，并且红芽芋胚性愈伤组织冻后再生苗没有发生形态性状和染色体数目的变异，此结果为长期安全保存江西铅山红芽芋种质资源奠定了良好的基础。