靶向调控缝隙连接蛋白43对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

摘要

cqvip:目的探讨缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesen chymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响。方法将Cx43目的基因克隆后与慢病毒载体pHBLV CMVIE Puro进行连接,重组载体与包装载体共同转染293T细胞后包装生产病毒。获取小鼠BMSCs,流式细胞术检测细胞表面标志。将慢病毒载体pHBLV Cx43 Puro(Cx43组)、pHBLV CMVIE Puro(空载体组)转染BMSCs,同时设立空白对照组;Western blot和qRT PCR检测三组细胞中Cx43的表达。成骨诱导培养基诱导三组细胞成骨分化,qRT PCR检测成骨相关基因Runt相关转录因子2(runt related transcrip tion factor 2,Runx2)、锌指结构转录因子(Osterix/Sp7)、转录活化因子4(activating transcription factor 4,ATF4)、骨唾蛋白(bone sialoprotein,BSP)的表达;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测试剂盒定量分析三组BMSCs的成骨分化能力。结果流式细胞术检查示BMSCs中CD29、CD44、CD90呈阳性表达,而CD14和CD34呈阴性表达,pHBLV Cx43 Puro转染BMSCs后Cx43蛋白和mRNA表达显著增加。成骨诱导后Cx43组成骨相关基因Runx2、Osterix/Sp7、ATF4和BSP的mRNA表达显著高于其他两组(P均<0.05),ALP活性明显高于其他两组(P<0.05)。结论Cx43高表达能够显著促进BMSCs向成骨细胞分化,其可能成为骨损伤修复的有效靶点。