快速微量提取番茄DNA及SSR-PCR反应体系的优化

摘要

以番茄叶片为试材,采用改进的CTAB法,电钻研磨,提取过程中加入醋酸铜,设计4因素3水平的正交试验对PCR反应体系进行优化,同时利用梯度PCR对退火温度进行选择选择.结果表明:优化的10μL反应体系含:1 × buffer,1.2 mmol/L Mg2+,1.5 mmol/L dNTPs,1.2 μmol/L引物,0.75 U Taq DNA聚合酶,10 ng模板DNA.扩增程序为:94℃预变性2 min;94℃变性30 s,49.2℃退火30 s,68℃延伸30 s,共35个循环;最后72℃延伸8 min.优化的反应体系可以用于SSR分子标记机的研究,在所有SSR引物中基本都能有效扩增;改进的CTAB法提取的DNA纯度更高.