正交设计优化番茄基因组DNA SSR-PCR反应体系

摘要

以21份番茄品种为材料,应用正交试验设计对影响番茄SSR-PCR的主要参数进行优化,建立适于番茄的SSR反应体系和扩增程序.在15 μl 体系中各反应的最适合含量为: 2.5 μlddH2O,1 μl40 ng模板DNA,3 μl200 μmol/L dNTP,3 μl0.8 μmol/L SSR引物,0.1 μl0.5 U/μlTaq DNA聚合酶,1.5 μl 10×PCR Buffer,0.9 μl1.5 mmol/L MgCl2.PCR适宜扩增程序为: 94 ℃预变性2 min;94 ℃变性1 min,45 ℃退火25 s,共35个循环;68 ℃延伸25 s,68 ℃延伸10 min,然后4 ℃保存.利用此反应体系对21个番茄品种进行PCR扩增并电泳检测,扩增结果清晰且有较高的多态性,表明该体系适合番茄的遗传多样性研究.