迁移侵袭抑制蛋白MIIP基因K167E位点突变体的构建和表达

摘要

目的 构建人迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)蛋白K167E突变体的原核表达载体pGEX-4T-1-MIIP(K167E)并进行表达和纯化,为MIIP的后续功能研究提供有效工具.方法 以pGEX-4T-1-MIIP重组质粒为模板,PCR扩增得到人MIIP基因(K167E)突变体的cDNA全长,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建获得pGEX-4T-1-MIIP(K167E)突变体,经酶切鉴定及测序验证完全正确后,将其转化至大肠杆菌BL21细胞中诱导表达,纯化获得GST-MIIP(K167E)融合蛋白.结果 酶切鉴定和测序结果显示,pGEX-4T-1-MIIP(K167E)突变体表达载体构建成功.经诱导表达及纯化后,成功获得的GST-MIIP(K167E)融合蛋白.结论 成功构建了pGEX-4T-1-MIIP(K167E)突变体表达载体,并获得了GST-MIIP(K167E)融合蛋白.