重组海蚯蚓纤溶酶的克隆、表达及活性鉴定

摘要

纤溶酶在溶栓治疗中起重要作用,能够溶解血凝块的主要成分纤维蛋白.采用RACE方法从海蚯蚓消化道组织中扩增出海蚯蚓纤溶酶编码序列,构建该基因原核表达载体,并进一步构建工程菌表达融合蛋白,经Ni2+树脂柱纯化后通过平板法检测该融合蛋白纤维蛋白酶原激活活性.结果获得海蚯蚓纤溶酶的cDNA序列和氨基酸序列,并成功构建重组表达载体pET-21a-AFE,表达纯化出融合蛋白,该融合蛋白能够激活纤维蛋白酶原而溶解纤维蛋白.总之,本研究获得了海蚯蚓纤溶酶的cDNA序列和氨基酸序列,并初步证明其具有纤维蛋白酶原激活活性,为临床新型溶栓药物的开发提供实验基础.