重组巴氏杆菌透明质酸合成酶的克隆、表达及活性鉴定

摘要

目的:构建重组巴氏杆菌透明质酸合成酶(rPmHAS)原核表达系统,获取高纯度、有活性的rPmHAS。方法:利用大肠杆菌BL-21 pET32a(+)表达重组蛋白,镍亲和柱纯化,夹心竞争ELISA法检测酶活性。结果:Western blotting检测显示特异性条带,重组蛋白正确表达,镍亲和柱纯化后得到重组蛋白的纯度可达90%。结论:成功构建了pET32a(+)/rPmHAS重组质粒并实现了目的蛋白高效可溶表达,为PmHAS性质相关研究及单一相对分子质量寡聚透明质酸的合成奠定了基础。