纳米粒子介导血管内皮生长因子基因治疗兔心肌缺血的疗效

摘要

目的观察纳米粒子介导血管内皮生长因子（VEGF）基因转染的可行性,了解心肌缺血动物模型经心肌直接注射VEGF基因纳米粒子后新生血管以及心功能改善情况。方法应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物（PLGA）和聚乙烯醇（PVA）包载VEGF165基因质粒,制备纳米级粒子混合物,检测其载药量、体外释放情况及粒径;培养乳鼠心肌细胞,转染VEGF165基因纳米粒子（VEGF纳米粒子）,应用RT-PCR法检测VEGF mRNA水平,ELISA法检测VEGF蛋白表达水平;将VEGF纳米粒子悬浮液注射至活体家兔心肌内,96h后心肌注射部位取材,电镜观察其向心肌组织内传递基因的可行性;建造兔心肌缺血模型,分别将VEGF纳米粒子（12只）、VEGF165裸质粒（12只）或生理盐水（对照组,8只）注射至缺血部位心肌,1个月后心脏超声监测,然后处死,组织学切片观察心肌组织中毛细血管生成情况。结果制备的纳米粒子载药量为1·87%,粒径为50~300nm;RT-PCR和ELISA结果提示纳米粒子可将目的基因转移至培养的心肌细胞中;体内实验显示心肌细胞胞质内及胞核内可见大量被吞噬的纳米粒子;术后1个月超声检查显示,VEGF纳米粒子组室壁运动幅度（1·87mm±0·32mm）、左室射血分数（60%±10%）较裸质粒组（1·59mm±0·24mm,50%±6%）及对照组（0·93mm±0·40mm,40%±8%）改善更加明显,各组之间差异均有统计学意义（均P＜0·05）;组织学检查显示,在100倍光镜视野下心肌内毛细血管数VEGF纳米粒子组（57个±12个）明显高于裸质粒组（41个±14个）及对照组（24个±8个）,各组之间差异有统计学意义（均P＜0·05）。结论纳米粒子可作为VEGF基因向心肌组织转运的载体,在兔心肌缺血模型经心肌直接注射VEGF165基因纳米粒子,能够促进心肌内毛细血管新生,达到改善心功能的目的。