目的:探讨经心包腔途径转染血管新生基因对缺血心肌的血管生成及舒缩功能的影响.方法:第一部分:随机将12头中国小型猪分为实验组和对照组,每组6头.两组猪均采用球囊堵塞前降支第一对角支远端以建立心肌梗死模型,心肌梗死模型建立后即刻,采用经皮剑突下穿刺方法,将中心静脉导管插入心包腔内转染Ad-LacZ.以胶原酶1200 u及透明质酸酶3000u预处理心包后,在心包腔内注射含Ad-LacZ基因2.0×109pfu.对照组心包腔内注射生理盐水.分别于注射后3天、7天及28天处死动物.对缺血心肌进行染色及病理观察.第二部分:随机将20头中国小型猪分为实验组和对照组,每组10头,每组又分3天(n=2)、7天(n=6)及28天(n=6)三个亚组.注射后3天、7天及28天分别用免疫组化、超声心动图对缺血心肌血管新生情况进行检测,并以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆、心包及心肌组织中Ad-VEGF165的表达.第三部分:20头小型猪随机分为心包转染组(心包组)和冠脉转染组(冠脉组).心包组和冠脉组均注射Ad-VEGF1651.0 ml(2×109pfu),于注射前及其后3、7、28天分别测定组织内VEGF水平、微血管密度(MVD)、心功能.结果:①实验组注射Ad-LacZ基因后第3天、第7天及28天后X-gal染色有阳性细胞.以第7天最明显,对照组无阳性细胞.②Ad-VEGF165基因经心包腔转染缺血心肌组织后,在心包及组织中成高表达,于7天达到高峰,28天降至基线水平,血浆中无目的基因的表达;28天时,实验组缺血心肌微血管密度(MVD)、心功能均明显高于对照组[MVD,517.0±75.7/mm2 v8 226.5±54.1/mm2,P=0.009:LVEF72.11±5.2% vs 55.14±4.37%,P=0.005].③心包组和冠脉组的心脏均表达有VEGF165基因,组织内VEGF水平在7天时达高峰,28天时降至基线水平,前组高于后组(702±85pg/ml vs 592±59 ps/ml,P=0.026).而两组的MVD、心功能随转染时间延长均明显增加,但心包组优于冠脉组(28d,MVD,517.0±75.7/mm2 vs 326.4±24.1/mm2,P=0.001;FS,32.9±2.2% vs 30.6±2.1%,P=0.049;LVEF,72.11±5.2% vs 65.87±2.16%,P=0.034).结论:①应用球囊堵塞法可成功建立猪急性心肌梗死模型.胶原酶及透明质酸酶预处理心包后,腺病毒载体可转染缺血心肌,并持续表达4周.②用胶原酶及透明质酸酶预处理心包腔后,经其转染Ad-VEGF165可以诱导急性心肌梗死模型局部VEGF蛋白表达,促进缺血心肌组织血管新生并能改善心功能.③导管介导的心包腔与冠脉转染Ad-VEGF165基因治疗心肌缺血是有效的、切实可行的,而前者可能是更有前途的新方法.
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