没食子儿茶素没食子酸酯诱导人肝癌细胞凋亡

摘要

目的探讨没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）诱导人肝癌细胞株凋亡的作用和机制。方法以不同浓度 EGCG 处理人肝癌细胞株 HepG2和 SMMC-7721细胞24h 和48 h。四甲基偶氮唑蓝比色法和锥虫蓝染色细胞计数评价细胞生长情况;流式细胞术检测细胞凋亡和环氧合酶-2（COX-2）、Bcl-2蛋白;比色法测定天冬氨酸蛋白酶-9和 caspase-3活性;RT-PCR 检测 COX-2和 Bcl-2家族 mRNA 的表达。结果 EGCG（50、100、200、400μg/ml）处理48h 后,HepG2细胞活性下降至93.8%±2.8%,62.3%±5.4%,33.9%±2.5%和17.6%±3.2%,与对照组（100.0%±2.8%）比较差异均有统计学意义（均 P＜0.05）;SMMC-7721细胞活性下降至49.6%±3.5%,30.3%±3.8%,17.7%±2.2%和13.0%±2.5%,与对照组（100.0%±0.8%）比较差异均有统计学意义（均 P＜0.05）;100μg/ml EGCG 处理细胞24、48、72和96h 后,HepG2活细胞计数（×10~4）分别是8.0±1.5,22.0±3.1,37.0±5.4和61.0±8.7,与对照组（15.0±2.5,45.0±5.3,86.0±11.0和210.0±23.0）相比明显减少,差异均有统计学意义（均 P＜0.05）;SMMC-7721活细胞计数（×10~4）分别是7.0±2.2,13.0±2.5,20.0±3.7和31.0±4.0,与对照组（14.0±2.2,40.0±4.3,75.0±8.8和182.0±28.0）相比明显减少,差异均有统计学意义（均 P＜0.05）。EGCG（50、100、200μg/ml）处理细胞12 h后,HepG2细胞凋亡率分别是8.7%±0.4%,18.1%±1.1%和22.1%±1.8%;SMMC-7721细胞凋亡率分别是5.9%±0.3%,7.8%±0.6%和12.2%±0.8%,与对照组（3.3%±0.3%）和（3.7%±0.4%）比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;EGCG（100、200μg/ml）处理细胞12 h 后,HepG2细胞caspase-9活性为1.8±0.4和2.5±0.4;caspase-3活性为2.0±0.4和2.8±0.5,两者与对照组（1.0±0.1和1.0±0.2）比较差异均有统计学意义（均 P＜0.05）;SMMC-7721细胞 caspase-9活性为1.7±0.4和2.5±0.4,caspase-3活性为1.9±0.4和2.6±0.3,均显著高于对照组（1.0±0.1和1.0±0.2,P＜0.05）。EGCG（200μg/ml）下调 COX-2和 Bcl-2的表达,而对 Bcl-2家族其他成员表达无明显影响。结论 EGCG 可能通过下调 COX-2和 Bcl-2的表达,激活 caspase-9和 caspase-3诱导肝癌细胞凋亡。