实时荧光PCR快速检测鼠疫耶尔森菌方法的建立

摘要

目的 建立一种能快速检测鼠疫耶尔森菌的实时荧光PCR方法.方法 以鼠疫耶尔森菌pla毒力基因的保守区为靶区域设计特异引物和TaqMan荧光探针,探针的5'端标记荧光报告基团FAM,3'端标记荧光淬灭基团TAMRA;建立一种能快速检测样本中鼠疫耶尔森菌的实时荧光PCR方法,并对方法的特异性和灵敏度进行评价.结果 该实时荧光PCR方法只对鼠疫耶尔森菌进行特异扩增,同种属的小肠结肠炎耶尔森菌以及伤寒杆菌、肺炎衣原体、嗜肺军团杆菌其他症状相似病原体均无扩增;该方法在65 min内即可完成检测,操作方便快速,对菌悬液最低可检测至10个菌体.结论 本研究建立的实时荧光PCR检测鼠疫耶尔森菌方法不仅能实现对鼠疫杆菌的快速检测,还可为鼠疫耶尔森菌引发疫情的监控和溯源提供参考.