噬琼胶菌产新琼二糖热稳定琼胶酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性

摘要

利用PCR从噬琼胶菌AL1中扩增琼胶酶基因,将其克隆至表达载体pET-28a;表达产物用亲和层析纯化,研究重组酶的酶学性质;利用薄层色谱和质谱鉴定酶解产物,并测定酶解产物的还原能力和清除DPPH、ABTS+和·OH自由基的能力,分析酶解产物的抗氧化活性.结果表明,来自噬琼胶菌AL1重组琼胶酶的分子质量为105 ku.该琼胶酶能专一地降解琼脂,为β-琼胶酶.重组琼胶酶在50°C和pH 7.0表现出最大酶活力,在50°C以下,pH 5.00～11.00宽pH范围内稳定性良好,说明该重组酶具有良好的热稳定性和pH稳定性.经薄层色谱和质谱鉴定酶解产物为新琼二糖,该酶解产物对·OH、ABTS和DPPH自由基的半数抑制剂量IC50分别为1.28 mg/mL、3.46 mg/mL和9.87 mg/mL,还原能力较强,说明该酶解产物具有良好的抗氧化活性.