实时荧光环介导等温扩增技术检测猪肉中的假单胞菌

摘要

根据假单胞菌16S rDNA基因序列设计引物,并向反应体系中加入饱和型核酸染料Eva Green,利用实时荧光检测仪,建立假单胞菌属实时荧光环介导等温扩增技术(LAMP).研究中对62株假单胞菌的16S rDNA基因通过DNAMAN软件进行序列比对后,针对共有片段设计扩增引物.对扩增体系进行了优化,优化结果经电泳鉴定.通过12株假单胞菌和23株非假单胞菌进行特异性验证,并比较了实时荧光LAMP与普通LAMP的灵敏度,对人工污染样品的检出限进行了测定.结果 表明,特异性验证中12株假单胞菌为阳性,23株非假单胞菌为阴性.实时荧光LAMP检测纯菌的灵敏度为36 CFU/mL,是普通LAMP灵敏度的10倍.人工污染样品的检出限为1.73× 103 CFU/g.本研究中建立了一种检测冷鲜猪肉中假单胞菌属的方法,实现了多个菌种的同时检测,避免了单一菌种检测的局限性,该方法快速、准确、灵敏度高,可在2h内完成冷鲜猪肉中假单胞菌的检测.