实时荧光环介导等温扩增技术检测牛奶中志贺氏菌的研究

摘要

三聚氰胺是一种有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺甲醛树脂。因为结构中含有大量的氮元素，使用一般常量凯氏定氮法检测乳制品及饲料中的蛋白质含量无法识别这种伪蛋白氮的干扰，不法厂家抓住这一检测缺陷，在部分婴幼儿奶粉及饲料中非法添加三聚氰胺，导致一系列安全问题的发生。乳制品是儿童和老人的主要营养品，饲料是动物营养物质的来源，为了保证这几类食品的安全，建立一种快速、准确、可靠的三聚氰胺分析方法是必要的。
　　本文分为两大部分，一部分是探究高效液相色谱法检测乳制品和饲料中的三聚氰胺;另一部分是利用GC-MS法对乳制品和饲料中的三聚氰胺进行定性定量检测。具体内容如下:
　　1.建立了一种既能测定乳制品又能测定饲料中三聚氰胺的高效液相色谱法。结果表明:采用1％三氯乙酸溶液作为乳制品及饲料样品中三聚氰胺的提取剂提取效果较好;经试验验证乙腈是乳制品和饲料类样品的最优蛋白沉淀剂，沉淀液经SCX强阳离子固相萃取柱净化，用冰乙酸调流动相pH值为3进高效液相色谱法(HPLC)测定，外标法定量。三聚氰胺在试验0.5～200mg/L浓度范围内具有良好的线性关系，其相关系数为0.9986，RSD在5％以下，加标回收率高于90％。本方法操作方便，具有较高的精密度和准确度，比较适合用作乳制品及饲料中三聚氰胺的定量分析。
　　2.建立了一种衍生化气相色谱法快速检测乳制品及饲料中三聚氰胺的检测方法，并对衍生条件进行优化。样品经过提取溶剂超声提取，以不低于4000r/min转速离心10min，上清液过固相萃取柱净化，收集洗脱液在50℃水浴中氮气吹干，用BSTFA+1％TMCS衍生剂和吡啶回溶，在微波功率800 W条件下衍生120s，最后过0.45μm微孔滤膜，供GC-MS检测分析。结果表明，当衍生剂用量为200μL，吡啶用量为400μL，微波功率800W，微波处理时间120s的条件下，所得到的样品处理效果最好。用该方法检测乳制品及饲料中三聚氰胺加标回收率较高，四种样品的加标回收率均高于96.9％，RSD均小于5.1％，并且在加标浓度范围内，具有较好的线性关系，其三聚氰胺检出限为0.016mg/kg，定量限为0.05mg/kg。传统的衍生反应需要在烘箱或水浴恒温30min，所需时间较长，在本实验中，用微波衍生的方法，大大减少了衍生化的时间，提高了衍生效率。本方法操作方便，具有较高的精密度和准确度，比较适合用作乳制品及饲料中三聚氰胺的定量分析。

目录

摘要

缩略表

1 前言

1．1 三聚氰胺简介

1．1．1 三聚氰胺的生产用途

1．1．2 三聚氰胺的毒性与危害

1．2 三聚氰胺样品前处理技术

1．2．1 溶剂萃取技术

1．2．2 固相萃取技术(SeE)

1．2．3 微萃取技术(ME)

1．2．4 超声波辅助萃取技术(UAE)

1．2．5 化学衍生化技术(CD)

1．2．6 渗透凝胶色谱技术(GPC)

1．3 三聚氰胺检测方法

1．3．1 苦味酸法和升华法

1．3．2 电位滴定法

1．3．3 试剂盒检测法(ELISA)

1．3．4 高效液相色谱分析法(HPLC)

1．3．5 液相色谱串联质谱法(LC-MS)

1．3．6 气相色谱串联质谱法(GC-MS)

1．4 三聚氰胺检测的原因和意义

1．4．1 三聚氰胺检测的原因

1．4．2 三聚氰胺检测的意义

1．5 三聚氰胺检测发展现状

1．6 本课题研究内容

2 HPLC法测定乳制品及饲料中的三聚氰胺

2．1 材料与试剂

2．1．1 试验材料

2．1．2 试验试剂

2．2 仪器与设备

2．3 试验方法

2．3．1 溶液的配制

2．3．2 样品处理

2．3．3 色谱分析条件

2．4 结果与讨论

2．4．1 三聚氰胺提取剂的选择

2．4．2 蛋白沉淀剂的选择

2．4．3 净化方法的选择

2．4．4 SCX柱萃取曲线

2．4．5 色谱分离条件

2．5 分析与方法评价

2．5．1 线性范围

2．5．2 准确度和精密度测试

2．5．2 检出限

2．6 小结

3 GC-MS法测定乳制品、饲料中的三聚氰胺

3．1 仪器与试剂

3．1．1 试验材料

3．1．2 试验试剂

3．2 仪器设备

3．3 试验方法

3．3．1 溶液的配制

3．3．2 样品前处理

3．3．3 色谱、质谱条件

3．4 结果与分析

3．4．1 衍生剂用量的优化

3．4．2 吡啶用量的优化

3．4．3 微波衍生条件的优化

3．4．4 色谱及质谱图分析

3．5 分析方法评价

3．5．1 线性范围

3．5．2 加标回收率及精密度

3．5．3 检出限

3．6 小结

参考文献

作者简历

致谢