AlphaLISA检测金黄色葡萄球菌肠毒素A方法的建立

摘要

目的 建立一种快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)的均相光激化学发光免疫分析法(AlphaLISA).方法 待测样本中的SEA与偶联有羊抗SEA多克隆抗体的受体微球、生物素化的小鼠抗SEA单克隆抗体发生反应,形成双抗体夹心结构,再与包被链霉亲和素的供体微球形成复合体.680 nm波长荧光激发供体微球上的光敏剂产生单线态氧,触发受体微球发出615 nm波长荧光,多功能酶标仪检测信号值,信号值高低与待测样本中SEA的浓度呈正比.结果 缓冲液中SEA的最低检出限(LOD)为0.1 ng/ml,线性范围0.2～50 ng/ml,相关系数R2为0.9941.检测体系不易受高糖、高盐和高蛋白等样本基质的影响,牛乳等液态模拟样本和10％(w/v)稀释的奶粉、豆干、火腿肠等固态食品模拟样本的LOD均为0.1 ng/ml.检测体系与其他4种肠毒素(SEB、SEC、SED、SEE)、A型肉毒毒素、蓖麻毒素、相思子毒素均无交叉反应,特异性较好.无论是缓冲液还是模拟样本检测,变异系数均小于10％,具有较好的重复性.结论 该法操作流程简便,检测灵敏度高、特异性强,检测时间为25 min,在金黄色葡萄球菌性食物中毒的鉴别诊断中具有较好的应用前景.