AlphaLISA检测金黄色葡萄球菌肠毒素E方法的建立

摘要

目的:利用AlphaLISA技术,建立新型均相检测方法,对金黄色葡萄球菌肠毒素E(SEE)进行检测.方法:采用2种SEE抗体建立AlphaLISA检测方法,羊抗肠毒多克隆抗体同受体微球偶联,SEE小鼠单克隆抗体标记生物素,并同偶联了亲和素的供体微球连接,3种组分与待测抗原形成双抗体夹心结构,680 nm的光激发供体微球产生能量,将周围反应体系中的氧分子转变为激发态,并将能量传递给受体微球,产生520～620 nm的荧光,荧光信号与抗原浓度正相关.对该方法的反应体系进行优化,验证其重复性、敏感性和特异性,并采用该方法检测菌液上清和食品模拟样本.结果:所建立的AlphaLISA检测方法重复性较好,批间变异系数和批内变异系数皆小于10％;检测SEE的灵敏度可以达到100 pg/mL,并与其他几种毒素均无交叉反应,具有较好的特异性.该方法也能够准确地对金黄色葡萄球菌菌液上清中的SEE进行检测,对食品模拟样本的检测也有较好的灵敏度.结论:建立了检测SEE的AlphaLISA方法.该方法均相免洗,操作便捷,用时短,灵敏度更高,可对菌液上清和不同食品模拟样本中的SEE进行检测.