金黄色葡萄球菌肠毒素A检测方法的建立及其应用

摘要

目的 建立一种敏感、特异、便捷的方法,用于检测食源性金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA).方法采用经典的细胞融合技术制备抗SEA的单克隆抗体,亲和层析纯化抗体蛋白,ELISA方法测定抗体滴度,免疫层析分析抗体亚型.以抗SEA单抗为一抗,建立Western印迹法,检测不同食物样品中的SEA.结果筛选出3株抗SEA的单抗,命名为SEA-7,SEA-18和SEA-86.纯化后的3株单抗纯度均>90％,抗体滴度均在1:32000,经鉴定均为IgG1亚型.利用3株单抗建立检测SEA的Western印迹法,SEA-7的检测灵敏度最高,可达1.56 ng.以SEA-7为一抗,可检测出不同食物中污染的SEA,如污染了1.56 ng SEA的水,污染了5 ng SEA的粥或火腿肠匀浆.结论建立的检测SEA方法可靠灵敏,可用于监测食源性金黄色葡萄球菌污染.