TFPR1通过激活树突状细胞并促进其成熟发挥佐剂功能

摘要

目的研究树突状细胞（DC）在重组蛋白TFPR1发挥佐剂功能中的作用。方法在无菌条件下取4~5周龄雄性BALB/c小鼠的骨髓细胞,小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rm GM-CSF）与重组白介素4（rm IL-4）诱导分化6 d后,加入TFPR1共孵育24 h,并以LPS处理为阳性对照、PBS为阴性对照,普通光学显微镜观察DC形态变化,罗丹明标记鬼笔环肽（TRITC Phalloidin）和DAPI共染色后,激光共聚焦显微镜观察细胞肌动蛋白和细胞核的分布情况,流式细胞术检测细胞表面CD40、CD80、CD86、MHCⅡ的表达水平,ELISA检测细胞培养上清中的细胞因子。结果在普通光镜和共聚焦显微镜下,加入TFPR1的DC与加入PBS的阴性对照DC相比具有显著的不同,而和加入LPS的阳性对照相似：光镜下发现大多数TFPR1处理的DC伪足变短直至消失,并变成圆形、悬浮于培养基中;激光共聚焦显微镜观察发现TFPR1处理的DC肌动蛋白由分布于细胞两极转至均匀分布于细胞膜上,从形态学上表明TFPR1可促进DC成熟;流式细胞术检测到TFPR1处理的DC表面CD40、CD80、CD86、MHCⅡ的表达量上调,进一步证明TFPR1具有促进DC成熟的作用。ELISA检测发现TFPR1处理的DC可产生高水平的IL-6、IL-8、TNF-α等细胞因子。结论 TFPR1不但能促进DC成熟,且能激活DC产生细胞因子,说明DC在TFPR1的佐剂功能中发挥重要作用。