植酸酶酵母工程菌的构建

摘要

从无花果曲霉(Aspergillus ficuum)3.4322中用RT-PCR方法扩增出一条约1.4 kb的特异性条带,DNA序列测定表明,目的片段为不含信号肽的植酸酶编码序列,全长1347 bp.无花果曲霉(Aspergillus ficuum)3.4322phyA基因序列已在GenBank注册(注册号为:AF537344).将该基因克隆到酵母表达载体pYES2中,构建成不带信号肽phyA基因的重组表达载体pYPA2.用醋酸锂法将pYPA2转进Ura缺陷型的酿酒酵母(S.cerevisiae INVSc1),筛选获得含植酸酶基因的酵母转化子.经半乳糖诱导表达后,用磷钼蓝显色(AMES)法对酵母菌体进行酶活测定,测出了明显的植酸酶活性,pYPA2胞内植酸酶活性约11.55 IU/mL,表明无花果曲霉(Aspergillus ficuum)3.4322phyA基因能在酿酒酵母中表达.