植酸酶和甘露聚糖酶双功能毕赤酵母工程菌的构建和产酶分析

摘要

根据已发表的植酸酶基因和甘露聚糖酶基因序列设计并合成引物,应用PCR技术,分别以土曲霉总DNA和质粒pHBM1201为模板,扩增出均不含假定信号肽序列的植酸酶基因 phyA 和甘露聚糖酶基因 man ,将它们各自克隆到毕赤酵母表达载体pHBM907C上,分别得到重组质粒pHBM907C- phyA 和pHBM907C- man .将质粒pHBM907C- phyA 上由乙醇氧化酶(AOX1)启动子和终止子引导表达、酿酒酵母α信号肽序列引导分泌的 phyA 表达盒式结构插入到质粒pHBM907C- man 中,构成双基因表达分泌质粒pHBM907C- phyA-man .pHBM907C- phyA-man 经 Sal Ⅰ酶切线性后转化毕赤酵母 (Pichia pastoris) GS115,获得了同时分泌表达植酸酶和甘露聚糖酶的双功能酵母工程菌.研究了该酵母工程菌所分泌表达的重组植酸酶和甘露聚糖酶的相关酶学性质,并进行了双功能酵母工程菌的稳定性测试.