人源抗HBsAg dsFv抗体靶向干扰素重组质粒的构建与表达

摘要

目的 构建抗体靶向干扰素的重组表达质粒pEE14.1-dsFvapr+,并在真核细胞中验证重组质粒的表达情况.方法 通过重叠延伸PCR将dsFv抗体重链基因与带正电荷的DNA负载区基因融合,并在抗体轻链α干扰素融合基因3'端连人6×His标签.先在过渡载体pCI-GPI中实现轻、重链复合基因的连接,然后连入pEE14.1中,最终构建重组表达质粒pEE14.1-dsFvapr+.将重组质粒Lipofectamine~(TM) 2000瞬时转染到CHO-K1细胞,采用RT-PCR、ELISA和Western blotting方法验证目的 基因的表达.结果 重组质粒经酶切鉴定和测序验证与设计完全一致.RT-PCR结果显示只有重组质粒转染后的细胞能够扩增出1700bp的目的 条带,ELISA检测瞬时转染细胞上清α干扰素的浓度约为1.1ng/ml,Western blotting检测显示重组质粒在转染细胞上清中获得表达.结论 实现了抗体靶向干扰素在单一质粒中的高效表达,通过对表达蛋白的电性改造有利于后期治疗慢性乙肝的抗体靶向纳米粒药物的研制.