人源抗HBsAg单链抗体与α干扰素融合蛋白酵母表达载体的构建

摘要

目的构建以人HBsAg单链抗体(HBScFv)为导向作用、α干扰素为治疗作用的融合蛋白酵母表达载体pPICZαB/ScFv-IFN-α.方法通过重叠PCR构建目的蛋白质基因,再亚克隆到酵母表达载体pPICZαB中,DNA测序后,转化巴氏毕赤酵母宿主菌GS115,菌落PCR、高浓度Zeocin 抗性筛选鉴定重组酵母,重组酵母经甲醇诱导后,通过SDS-PAGE分析鉴定表达产物.结果 DNA测序结果显示构建的目的基因片段(HBScFv-IFN-α)的序列与原设计序列相符合;菌落PCR结果显示目的基因已整合到酵母菌中;诱导表达后,SDS-PAGE结果显示在相对分子质量约44 000处可见目的蛋白质表达带.结论成功构建了抗HBsAg单链抗体与α干扰素融合蛋白酵母表达载体.