干扰TonEBP基因对Raw264.7细胞迁移、增殖和吞噬功能的影响

摘要

目的探讨张力反应性增强因子结合蛋白(tonicity-responsive enhancer binding protein,TonEBP)基因对巨噬细胞活性、迁移、增殖及吞噬功能的影响。方法利用TonEBP-shRNA慢病毒感染Raw 264.7细胞,筛选稳定细胞株,Real time-PCR、Western blot评估干扰效率,选取干扰效率最高的慢病毒感染组及空载慢病毒感染组用于后续实验。各组细胞同步培养,孵育24 h后CCK-8法测定细胞活性,transwell实验观察细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞周期及吞噬功能。结果成功建立并筛选出干扰TonEBP稳定细胞株,与正常细胞组相比,mRNA和蛋白的干扰效率均高于70%,差异具有统计学意义(P<0.05);下调TonEBP表达可使细胞活性明显下降[24 h(0.39±0.02 vs 0.46±0.01),48 h(0.57±0.02 vs 0.63±0.02),72 h(0.71±0.02 vs 1.01±0.11),96 h(0.93±0.06 vs 1.42±0.04),120 h(1.26±0.06 vs 1.56±0.09)](P<0.05),同时显著降低细胞迁移(88±7.00 vs 356±35.23)、增殖[(38.73±2.57)%vs(50.20±2.29)%]及吞噬[(2.26±0.10)%vs(5.63±0.42)%]能力,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论干扰TonEBP的表达可有效抑制巨噬细胞活性,降低其迁移、增殖及吞噬能力,为继续探究与巨噬细胞相关的疾病提供实验依据。