重组牛肠激酶轻链基因在毕赤酵母中的表达与纯化

摘要

目的:构建重组牛肠激酶轻链的基因工程菌,并进行表达和纯化,以获得高纯度和高活性的重组牛肠激酶轻链蛋白.方法:以GenBank公共数据库中的牛肠激酶轻链基因序列(Accession No.NM174439)设计引物,利用RT-PCR合成牛肠激酶轻链基因片段,并克隆进pPIC9K载体,同时在基因N端插进6个组氨酸标签,转化毕赤酵母GS115,进行筛选和诱导表达.产物经镍离子螯和层析和Q-Sepharose FF柱纯化,并酶切融合蛋白检测其活性.结果:培养液中重组牛肠激酶轻链蛋白表达量为3.0 mg/L.对含有肠激酶酶切位点的IL-11/MBP融合蛋白进行酶切,结果表明,酶解率可达到90%以上.结论:表达并获得了高纯度的重组肠激酶轻链蛋白,为大规模生产打下了基础.