重组牛肠激酶轻链基因在大肠杆菌中的表达与纯化

摘要

肠激酶(Enterokinase,EK,EC3.4.21.9)是一种以异源二聚体形式存在于哺乳动物十二指肠内的丝氨酸蛋白酶,通过在位点(Asp)4-Lys的羧基端进行高效特异酶切,将胰蛋白酶原激活为胰蛋白酶。以GenBank公共数据库中牛肠激酶轻链基因序列(Acces-sion No.NM174439)设计引物,利用RT-PCR方法合成牛肠激酶轻链基因片段,并克隆进pET39b载体中DsbA片段的C’端,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得DsbA/牛肠激酶轻链融合蛋白。经镍离子螯合层析纯化,每升培养液中可得到2.7-3.0mg重组牛肠激酶。对含有肠激酶酶切位点的IL-11/MBP融合蛋白进行酶切,结果表明,酶解率可达到95%以上,为重组牛肠激酶的大规模生产打下了基础。