结核分枝杆菌esat6-mpt64融合基因真核表达载体的构建

摘要

目的:构建结核分枝杆菌分泌蛋白基因esat6-mpt64的真核表达载体.方法:用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv株基因组中分别扩增esat6、mpt64基因,插入pGEM-T-easy载体,序列测定正确后,将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+);重组质粒经酶切鉴定正确后,用LipofectAMINE2000转染COS-7细胞;用RT-PCR检测mRNA的表达,用间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达.结果:RT-PCR表明esat6-mpt64融合基因可在COS-7细胞中转录;用间接免疫荧光检测,有表达蛋白的细胞着染.结论:构建了真核表达载体pcDNA-esat6-mpt64,并在真核COS-7细胞中表达.