枯草芽胞杆菌突变株ZC-7中性蛋白酶催化区域氨基酸突变导致其活力提高

摘要

目的:探讨枯草芽胞杆菌突变株ZC-7高产中性蛋白酶的原因.方法:用PCR方法分别扩增突变株ZC-7与出发菌株枯草芽胞杆菌AS1.398产中性蛋白酶的编码基因,测序比较二者基因的不同;在CPHmodels Server网站进行氨基酸序列分析,模拟突变前后中性蛋白酶的二级结构.结果:对比结果显示成熟肽中有5个氨基酸位点发生突变,其中3个位于酶的催化区域内;从预测的二级结构模型上可以看到突变位点所处区域的折叠结构发生细微变化.结论:先前研究中发现枯草芽胞杆菌AS1.398和突变株ZC-7发酵液中的酶蛋白含量基本相同,因此推测高产的原因不是酶量的增加,而是突变的氨基酸使酶与底物结合的部位更加适合催化水解反应,从而提高其比活力.