gas6基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞的构建及鉴定

摘要

目的:制备携带生长停滞特异性基因6(gas6)的慢病毒,并构建和鉴定稳定表达生长停滞特异性蛋白6(GAS6)的小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs).方法:采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs,用流式细胞术检测MSCs标志分子;根据GenBank中小鼠gas6基因序列设计并合成上下游引物,以MSCs提取的mRNA制备的cDNA为模板扩增gas6基因片段,克隆入慢病毒表达载体,获得Lenti-gas6-GFP-zeocin质粒并测序鉴定;采用三质粒包装系统(穿梭质粒pLenti-gas6-GZ、包装质粒pSPAX2和pMD2.G)包装慢病毒,并验证其表达目的基因情况;将浓缩的慢病毒离心感染第4代MSCs,用吉欧霉素(zeocin)筛选培养后获得稳定表达GAS6的MSCs,采用流式细胞术检测其阳性率以及表面标志分子表达情况.结果:构建了携带gas6基因的慢病毒,建立了gas6基因修饰的MSCs.结论:慢病毒载体可介导gas6基因在小鼠MSCs中过表达,且不会干扰MSCs的生物特性,为进一步研究gas6基因修饰的MSCs的治疗作用奠定了实验基础.