TRAIL胞外区编码基因的设计、人工合成及其表达

摘要

根据大肠杆菌密码子偏爱性要求,设计编码TRAIL胞外段（114-281氨基酸）的DNA序列,分段合成拼接引物并连接,得到目的基因,PCR扩增后克隆于T载体中,经测序证实后,PCR法在目的基因的5′,末端引入肠激酶识别位点EKsite的编码序列,重组于胞内融合表达型T载体中,构建成pDsbA-6His-EKsite-TRAIL胞内融合表达质粒,重组质粒转化表达宿主E.coliBL21（DE3）.在33℃条件下,添加终浓度为0.4 mmol/L的IPTG诱导表达,全菌SDS-PAGE分析结果表明：所构建的工程菌能表达44 kD左右的TRAIL融合蛋白,与理论值相符.