TRAIL分子胞外区基因工程蛋白的制备与鉴定

摘要

目的制备人TRAIL配体胞外区基因工程蛋白.方法应用RT-PCR技术从激活的人外周血淋巴细胞总RNA中扩增TRAIL配体胞外区cDNA,克隆入PCR2,1载体,测序验证后用基因重组法构建了TRAIL配体胞外区和组氨酸盒的原核表达质粒pQE-hTRAIL.将重组质粒转入大肠杆菌M15中表达,经1mmol/LIPTG在37℃条件下诱导4 h,亲和层析柱纯化.用SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定表达产物.结果所表达融合蛋白为人TRAIL配体胞外区分子,分子量30kD.表达量约为2mg/ml.结论人TRAIL配体胞外区在大肠杆菌中得到良好表达,为深入研究TRAIL配体分子在肿瘤与自身免疫病中的可能应用提供了材料.