层粘连蛋白特异性受体--整合素α6亚单位胞外区单克隆抗体的制备及鉴定

摘要

目的:制备针对整合素α6胞外区的单克隆抗体并鉴定其生物学特异性.方法:利用整合素α6 cDNA构建可表达整合素α6胞外区的原核表达载体,在大肠杆菌中表达GST--整合素α6胞外区融合蛋白.融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫Balb/C小鼠,取其脾细胞,用传统杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合及次黄嘌呤、氨基喋呤与胸苷选择性培养.单克隆杂交瘤上清经ELISA双筛后,分析其亚类及进行免疫细胞化学鉴定.结果:经ELISA双筛,获得了一株能稳定分泌针对整合素α6胞外区的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌抗体亚类为IgG1.免疫细胞化学显示此单抗在人肝癌细胞系BEL-7402呈强阳性反应.结论:通过原核表达产物制备并纯化了针对整合素α6胞外区的单克隆抗体,对分离纯化α6亚单位、研究其生物学作用及鉴定正常和疾病状态下是否表达整合素α6及其水平具有重要意义.