以原癌基因K—ras基因12位密码子的4种基因型(野生型为GGT,突变型为AGT、TGT、CGT)质粒DNA为研究模型.采用SYBR Green I为实时PCR指示剂,进行ARMS实时PCR基因分型特异性的研究.结果表明:在和模板匹配的ARMS引物3′端附近引人故意错配碱基.将ARMS引物浓度稀释10倍,并对传统三步PCR循环进行改良.即根据目的产物和引物二聚体的熔点差异.在传统延伸步骤之后增加一步恒温80℃检测荧光步骤。可消除引物二聚体的影响.使ARMS引物的特异性增强.得到清晰的基因分型结果.实验表明这种基于SYBR Green I的ARMS实时PCR基因分型方法,无需合成探针,实验设计简单.是一种快速、简便、经济、特异性好的基因分型方法,可推广用于其他基因的分型。并可望成为应用于临床的基因诊断技术之一.
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