CXCR7-shRNA靶向抑制结肠癌SW620细胞的体外实验研究

摘要

目的 探讨慢病毒介导的CXCR7-shRNA转染人结肠癌细胞株SW620后对CXCR7蛋白表达的影响.方法 ①设计并合成CXCR7的3对shRNA序列及1对阴性对照序列,与pSilencerTM4.1系统合成构建重组慢病毒载体,转染HEK293T细胞包装病毒并检测滴度;②将3种重组慢病毒载体及阴性对照分别感染人结肠癌细胞SW620,RT-PCR检测CXCR7 mRNA的表达情况,测定沉默效率,筛选沉默效率最高的一组CXCR7-shRNA作为后续实验的表达载体;③MTT法检测转染CXCR7-shRNA对SW620细胞生长增殖的影响;④细胞划痕实验检测转染CXCR7shRNA对SW620细胞侵袭迁移能力的影响;⑤Western blot检测转染CXCR7-shRNA对SW620细胞蛋白表达情况.结果 ①测序证实3对慢病毒载体及1对阴性对照载体均包装成功,滴度分别3.16×108 pfu/mL、4.27×108 pfu/mL、3.93×108 pfu/mL和2.95×108 pfu/mL;②3组慢病毒载体转染SW620细胞后,CXCR7 mRNA的表达量均较阴性对照组明显降低(P＜0.05),其中CXCR7-shRNA-1对CXCR7的抑制率明显高于其他两组(P＜0.05);③CXCR7-shR-NA-1转染SW620后,肿瘤细胞的增殖程度显著减少,与空白组相比有统计学差异(P＜0.05);④SW620细胞在划痕24 h后,空白对照组和实验组的细胞迁移指数(MI)分别为(49.92±6.41)％和(29.13±5.38)％,差异有统计学意义(P＜0.05),划痕48h后,对照组与实验组的MI分别为(96.52±7.44)％和(72.03±8.29)％,差异有统计学意义(P＜0.05);⑤CXCR7-shRNA-1转染SW620细胞后,与空病毒载体组、空白组相比,CXCR7蛋白表达量明显降低,具有统计学意义(P＜0.05).结论 CXCR7被沉默后可有效抑制SW620肿瘤细胞的增殖与迁移,这为后续研究以CXCR7/CXCL12生物学轴为靶点的肿瘤基因治疗打下良好基础.